海洋细菌MicrobacteriumesteraromaticumMCDA02产几丁质脱乙酰酶发酵条件优化（三） 当装液量达到20％时

（4）装液量对菌株MCDA02发酵产CDA的海洋影响装液量对菌株MCDA02生长的影响如图10，装液量低于20％时，细菌酰酶随着装液量的丁质增加，菌株的脱乙条件产酶量逐渐升高，当装液量达到20％时，发酵产酶量达到最高。优化装液量继续增大，海洋菌株MCDA02的细菌酰酶产酶量降低。
 

（5）接种量对菌株MCDA02发酵产CDA的丁质影响接种量对菌株MCDA02生长的影响如图11，接种量在0.5％～4％之间时菌株都能比较好地产酶，脱乙条件相对酶活达到70％以上。发酵接种量为1％时，优化菌株相对酶活最高。海洋
 

（5）响应面优化发酵条件实验设计

从单因素中选取碳源、细菌酰酶无机盐和发酵培养基初始pH三个因素为因变量，丁质运用DesignofExperiments进行三因素三水平响应面实验设计，共计17个试验点的Box-Behnken响应面分析试验(表2)。实验设计与响应值结果，如表3。

运用DesignofExperiments进行方差分析和回归分析(表3)，拟合得到回归方程如下：

Y=-52.244+8.9515*A+279.125*B+10.807*C-30.5*A*B-0.64*A*C-2l*B*C-1.107*A2-817.5*B2-0.577*C2

由表4可知：模型P＜0.01，表明该方程模型极显著，不同处理间的差异性极显著；失拟项P＞0.05，表明模型失拟项不显著l从F值的大小可以得到，一次项中各因素对几丁质脱乙酰酶酶活的影响顺序是C＞A＞B，交互相对酶活影响的主次顺序为AC＞AB＞BC。模型的R2为0.9512，说明该模型能解释95.12％响应值的变化，因而该模型拟合程度良好，试验误差小，可以用于预测最优发酵条件参数。结果表明，最佳发酵条件为：木薯淀粉1.09％、ZnS0₄0.05％、pH7.86，预期酶活2.01U／mL。结合实际，我们将发酵条件调整为木薯淀粉1.1％、ZnSO₄0.05％、pH7.9。经过后期验证测得酶活2.06U／mL。与预期基本符合。比优化之前提高了1.41倍。优化后菌株MCDA02发酵产CDA水平为2.06U／mL，低于部分报道的细菌发酵几丁质脱乙酰酶的发酵水平。

三、结论

从高公岛采集的海泥中，筛选获得了3株产几丁质脱乙酰酶菌株，菌株MCDA02发酵产酶水平最高。通过形态学特征、生理生化特性及16SrDNA分析将菌株MCDA02鉴定为Microbacteriumesteraromaticum。优化获得了菌株MCDA02的最佳发酵条件，优化后酶活为2.01U／mL，较优化前酶活1.43U／mL，提高了1.41倍。

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